Gwida tax-Xjenza tas-Sajf: Meta Mewġa ta' Sħana ta' 40°C Tiltaqa' ma' Esperimenti Molekulari

Riċentement, temperaturi għoljin ippersistaw f'ħafna miċ-Ċina. Fl-24 ta' Lulju, l-Osservatorju Meteoroloġiku Provinċjali ta' Shandong ħareġ twissija safra ta' temperatura għolja, fejn bassar temperaturi "simili għal sawna" ta' 35-37°C (111-133°F) u umdità ta' 80% għall-erbat ijiem li ġejjin f'żoni interni. It-temperaturi f'postijiet bħal Turpan, Xinjiang, qed joqorbu t-48°C (111-133°F). Wuhan u Xiaogan, Hubei, jinsabu taħt twissija oranġjo, b'temperaturi li jaqbżu s-37°C f'xi żoni. F'din is-sħana qawwija, id-dinja mikroskopika taħt il-wiċċ tal-pipetti qed tesperjenza disturbi mhux tas-soltu—l-istabbiltà tal-aċidi nuklejċi, l-attività tal-enzimi, u l-istat fiżiku tar-reaġenti huma kollha distorti bil-kwiet mill-mewġa tas-sħana.

L-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku saret tellieqa kontra l-ħin. Meta t-temperatura ta' barra taqbeż l-40°C, anke bl-arja kondizzjonata mixgħula, it-temperatura tal-mejda tal-operazzjoni spiss tkun 'il fuq minn 28°C. F'dan iż-żmien, il-kampjuni tal-RNA li jitħallew fil-beraħ jiddegradaw aktar minn darbtejn aktar malajr milli fir-rebbiegħa u l-ħarifa. Fl-estrazzjoni tal-żibeġ manjetiċi, is-soluzzjoni buffer tkun saturata lokalment minħabba l-volatilizzazzjoni aċċellerata tas-solvent, u l-kristalli jiġu preċipitati faċilment. Dawn il-kristalli jikkawżaw varjazzjonijiet kbar fl-effiċjenza tal-qbid tal-aċidu nuklejku. Il-volatilità tas-solventi organiċi tiżdied simultanjament. F'temperatura ta' 30°C, l-ammont ta' volatilizzazzjoni tal-kloroform jiżdied b'40% meta mqabbel ma' 25°C. Waqt l-operazzjoni, huwa meħtieġ li jiġi żgurat li l-veloċità tar-riħ fil-kappa tal-fwar tkun 0.5m/s, u jintużaw ingwanti tan-nitrile biex tinżamm l-effettività protettiva.

L-esperimenti tal-PCR jiffaċċjaw disturbi fit-temperatura saħansitra aktar kumplessi. Reaġenti bħall-enzima Taq u r-reverse transcriptase huma estremament sensittivi għal varjazzjonijiet f'daqqa fit-temperatura. Il-kondensazzjoni fuq il-ħitan tat-tubu wara t-tneħħija minn friżer ta' -20°C tista' tikkawża telf ta' aktar minn 15% fl-attività tal-enzima jekk tidħol fis-sistema ta' reazzjoni. Is-soluzzjonijiet tad-dNTP jistgħu wkoll juru degradazzjoni li tista' tiġi osservata wara biss 5 minuti ta' espożizzjoni għat-temperatura tal-kamra (>30°C). It-tħaddim tal-istrument huwa wkoll imfixkel minn temperaturi għoljin. Meta t-temperatura ambjentali tal-laboratorju tkun >35°C u t-tneħħija tad-dissipazzjoni tas-sħana tal-istrument tal-PCR ma tkunx biżżejjed (<50 ċm mill-ħajt), id-differenza fit-temperatura interna tista' tilħaq sa 0.8°C. Din id-devjazzjoni tista' tikkawża li l-effiċjenza tal-amplifikazzjoni fit-tarf ta' pjanċa ta' 96-bir tinżel b'aktar minn 40%. Il-filtri tat-trab għandhom jitnaddfu regolarment (l-akkumulazzjoni tat-trab tnaqqas l-effiċjenza tad-dissipazzjoni tas-sħana b'50%), u għandu jiġi evitat l-arja kondizzjonata diretta. Barra minn hekk, meta twettaq esperimenti tal-PCR matul il-lejl, evita li tuża l-istrument tal-PCR bħala "refriġeratur improvviżat" biex taħżen il-kampjuni. Il-ħażna f'4°C għal aktar minn sagħtejn tista' tikkawża li tifforma kondensazzjoni wara li jingħalaq l-għatu msaħħan, u b'hekk tiddilwixxi s-sistema ta' reazzjoni u potenzjalment tikkorrodi l-moduli tal-metall tal-istrument.

Meta jiffaċċjaw twissijiet persistenti ta’ temperaturi għoljin, il-laboratorji molekulari għandhom ukoll idoqqu l-allarm. Kampjuni prezzjużi tal-RNA għandhom jinħażnu fuq wara ta’ friżer ta’ -80°C, b’aċċess ristrett għal perjodi ta’ temperaturi għoljin. Il-ftuħ tal-bieba ta’ friżer ta’ -20°C aktar minn ħames darbiet kuljum se jaggrava l-varjazzjonijiet fit-temperatura. Tagħmir li jiġġenera sħana għolja jeħtieġ mill-inqas 50 ċm ta’ spazju ta’ dissipazzjoni tas-sħana fuq iż-żewġ naħat u fuq in-naħat ta’ wara. Barra minn hekk, huwa rakkomandat li l-ħin sperimentali jiġi ristrutturat: 7:00-10:00 AM għal operazzjonijiet sensittivi għat-temperatura bħall-estrazzjoni tal-RNA u t-tagħbija tal-qPCR; 1:00-4:00 PM għal xogħol mhux sperimentali bħall-analiżi tad-dejta. Din l-istrateġija tista’ tipprevjeni b’mod effettiv li l-qċaċet tat-temperatura għolja jinterferixxu mal-passi kritiċi.

Esperimenti molekulari waqt mewġa ta’ sħana huma test kemm tat-teknika kif ukoll tal-paċenzja. Taħt ix-xemx bla waqfien tas-sajf, forsi wasal iż-żmien li tpoġġi l-pipetta tiegħek fil-ġenb u żżid kaxxa żejda ta’ silġ mal-kampjuni tiegħek biex tħalli l-istrument ixerred aktar sħana. Din ir-rispett għall-varjazzjonijiet fit-temperatura hija preċiżament l-aktar kwalità prezzjuża tal-laboratorju matul ix-xhur sħan tas-sajf—wara kollox, fis-sħana ta’ 40°C tas-sajf, anke l-molekuli jeħtieġu “reġjun polari artifiċjali” mħares bir-reqqa.